Методы микроскопии. тинкториальные свойства бактерий и способы их изучения

Самые распространенные красители

Чаще всего используются красители на основе анилина с разными значениями кислотных показателей (рН). Большинство красителей – порошки, которые разводят в спирте.

Красители, в которых красящими агентами являются катионы, называются основными (рН больше 7). С их помощью можно окрасить микроорганизмы в красный (фуксин, сафранин), фиолетовый (метилвиолет, тионин), синий (метиленовая синь), зеленый (малахитовая зелень), коричневый (хризоидин) и черный (индулин) цвета.

Красители, в которых красящими агентами являются анионы, называются кислотными (рН меньше 7). Они покрасят образец в красный (эозин), желтый (пикрин) или черный (нигрозин) цвета.

Есть группа нейтральных красителей (например, родамин В), где красящими агентами выступают и катионы, и анионы.

Врачи и микробиологи подчеркивают важность методов микроскопии для изучения бактерий и их тинкториальных свойств. Эти методы позволяют визуализировать микроорганизмы, что критично для диагностики инфекционных заболеваний. Использование различных красителей, таких как грамм-окрашивание, помогает различать грамположительные и грамотрицательные бактерии, что имеет значение для выбора правильной терапии.

Современные технологии, такие как флуоресцентная микроскопия, открывают новые горизонты в исследовании бактерий, позволяя изучать их поведение и взаимодействие с окружающей средой. Врачи отмечают, что понимание тинкториальных свойств бактерий способствует разработке более эффективных методов лечения и профилактики инфекций. Таким образом, методы микроскопии остаются неотъемлемой частью микробиологических исследований и клинической практики.

Микроскопия МИКРОБИОЛОГИЯ: виды микроскопии, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ — Е. Л. Зайцева — 2015

ГЛАВА IV. МИКРОСКОПИЯ БАКТЕРИЙ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ

Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, при выявлении запасных веществ клетки. Определение формы и подвижности бактерий из свежевыделенной культуры проводится в препаратах «раздавленной» или «висячей» капли, т. е. в капле на предметном стекле, покрытом покровным.

МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ НАТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ

I. Метод «раздавленной капли». Для приготовления препарата «раздавленной капли» необходимо использовать хорошо обезжиренные стекла, т. к. на поверхности пыльных и жирных стекол микробные клетки не фиксируются.

Материалы:

1) предметное стекло;

2) покровное стекло;

3) изотонический раствор хлорида натрия;

4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

6) спиртовка.

Техника приготовления:

1. На середину обезжиренного предметного стекла бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой наносят бульонную культуру и равномерно распределяют на площади в 1 см2.

Для приготовления мазка из агаровой культуры на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора и в ней эмульгируют одну петлю микробов, взятой со среды.

2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом, и прижимают его к предметному так, чтобы не образовывались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.

3. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.

При работе с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.

Недостаток метода «раздавленной капли» — быстрое высыхание препарата, поэтому его надо микроскопировать сразу после приготовления.

II. Метод «висячей капли» при определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.

Материалы:

1) предметное стекло с лункой;

2) покровное стекло;

3) изотонический раствор хлорида натрия (NaCl);

4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

6) спиртовка.

Техника приготовления:

1. Берут покровное (не предметное), стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.

2. Накрывают перевернутым предметным стеклом с лункой, но с таким расчетом, чтобы капля оказалась в ее центре. Для сцепления стекол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

3. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.

Оценка результата: неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные — проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.

III. Прижизненная окраска бактерий. Для такой окраски применяются сильно разбавленные растворы красителей, которые не оказывают токсического действия на бактерии.

Материалы:

1) предметное стекло;

2) покровное стекло;

3) 0,001% раствора метиленового синего;

4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

6) спиртовка.

Техника приготовления:

1. На середину предметного стекла наносят каплю 0,001% раствора метиленового синего, в которую следует внести взвесь бактерий.

2. После чего приготовить препарат «раздавленная капля» и микроскопировать его.

ПредыдущаяСледующая

Методы микроскопии играют ключевую роль в изучении бактерий, позволяя исследовать их морфологию и тинкториальные свойства. Специалисты отмечают, что использование различных красителей, таких как грам-окрашивание, помогает дифференцировать бактерии на грамположительные и грамотрицательные, что имеет важное значение для диагностики инфекционных заболеваний. Современные техники, такие как флуоресцентная микроскопия, открывают новые горизонты в визуализации клеточных структур и процессов. Исследователи также подчеркивают важность электронных микроскопов, которые обеспечивают высокое разрешение и позволяют изучать ультраструктуры бактерий. Эти методы не только углубляют наше понимание микробиологии, но и способствуют разработке новых антибиотиков и методов борьбы с инфекциями.

https://youtube.com/watch?v=NIRCkWaysjE

Грамположительные и грамотрицательные

Именно такие характеристики бактерий можно встретить в инструкциях к различным медицинским препаратам.

Этот способ изучения тинкториальных свойств бактерий основан на использовании генциантового фиолетового красителя и фиксации йодом. Это методика Ганса Кристиана Грама, датского врача, который предложил ее в 1884 году. В результате такого окрашивания бактерии делятся на две группы:

• Грам (+) – окрашиваются в синий цвет (стафилококки и стрептококки).
• Грам (-) – окрашиваются в цвет от розового до красного (энтеробактерии, сальмонеллы, кишечные палочки).

Различный результат окрашивания получается из-за неодинаковых тинкториальных свойств стенок бактерий.

Метод окраски Грама и сегодня является основным при диагностике некоторых инфекционных болезней.

Вопрос-ответ

Классификация микроорганизмов .Морфология бактерий.

Какие свойства бактерий изучают микроскопическим методом?

Микроскопический метод (бактериоскопический) исследования (БСМИ) — это метод исследования свойств микроорганизмов с помощью микроскопа. Изучаются форма бактерий (кокки, палочки, извитые) размеры, взаиморасположение, их структура, а также способность воспринимать различные красители.

Что такое тинкториальные свойства бактерий?

Тинкториальные свойства бактерий характеризуют: Устойчивость во внешней среде Устойчивость к действию физических факторов Чувствительность к бактериофагам

Какие методы используют для изучения микроорганизмов?

Такие лаборатории оснащены средствами дезинфекции и стерилизации. Основными методами исследования в микробиологии являются: – Микроскопический (бактериоскопичсский и вирусоскопический), – Культивирование и выделение чистых культур микроорганизмов.

Какие методы идентификации бактерий?

К ручным методам идентификации микроорганизмов относят: систему индикаторных бумажек, наборы мультимикротестов, метод хроматографии. Ручные тесты, применяемые для индикации и идентификации микроорганизмов, важны для медицинской микробиологии и широко используются в санитарной микробиологии.

Советы

СОВЕТ №1

Изучайте основы тинкториальных свойств бактерий, чтобы лучше понимать, как различные красители взаимодействуют с клеточными структурами. Это поможет вам выбрать правильные методы окраски для ваших образцов.

СОВЕТ №2

При работе с микроскопией используйте высококачественные микроскопы и объективы, чтобы получить четкие и детализированные изображения. Это особенно важно при изучении мелких деталей клеточной структуры.

СОВЕТ №3

Не забывайте о правильной подготовке образцов. Тщательная фиксация и окраска образцов могут значительно улучшить визуализацию и анализ тинкториальных свойств бактерий.

СОВЕТ №4

Проводите эксперименты с различными методами микроскопии, такими как флуоресцентная или электронная микроскопия, чтобы расширить свои знания и навыки в изучении бактерий и их свойств.